WWW.KNIGI.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |

«АмплиСенс Федеральное бюджетное учреждение науки Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии, Российская Федерация, 111123, город Москва, улица ...»

-- [ Страница 1 ] --

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов

для количественного определения ДНК генетически

модифицированной сои в продуктах питания и кормах для

животных методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с

гибридизационно-флуоресцентной детекцией

«АмплиКвант ГМ соя-FL»

АмплиСенс

Федеральное бюджетное учреждение науки

«Центральный научно-исследовательский

институт эпидемиологии», Российская Федерация, 111123, город Москва, улица Новогиреевская, дом 3а

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

НАЗНАЧЕНИЕ

ПРИНЦИП МЕТОДА

ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА....

ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК

ФОРМАТ FRT

СОСТАВ

ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ

ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ

ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО

ВРЕМЕНИ»

А. Подготовка пробирок для проведения ампификации

Б. Проведение амплификации и анализ результатов при использовании приборов Rotor-Gene 3000/6000 (Corbett Research, Австралия) и Rotor-Gene Q (Qiagen, Германия)

В. Проведение амплификации и анализ результатов при использовании прибора iQ iCycler/iQ5 (Bio-Rad, США)

Г. Проведение амплификации и анализ результатов при использовании прибора «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия)

Д. Проведение амплификации и анализ результатов при использовании прибора «АНК-16»/«АНК-32» (ЗАО «Синтол», Россия)

СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ

СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ

Формат FRT Форма 2: REF R-G2-M(RG,iQ,Dt,Ank) / VER 08.10.12 / стр. 2 из

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения:

- Генетически модифицированный c ГМИ - Генетически модифицированные ингредиенты В– - Отрицательный контроль экстракции К+ - Положительный контроль ПЦР К– - Отрицательный контроль ПЦР ОКО - Отрицательный контрольный образец ПКО - Положительный контрольный образец ПЦР - Полимеразная цепная реакция - Флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»

FRT - Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный

ФБУН ЦНИИ

научно-исследовательский институт эпидемиологии»

Эпидемиологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав Роспотребнадзора потребителей и благополучия человека ЭК - Эндогенный контроль -Relative standard deviation for repeatability (относительное RSDr стандартное отклонение повторяемости) -Relative standard deviation for reproducibility (относительное RSDR стандартное отклонение воспроизводимости)

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов «АмплиКвант ГМ соя-FL» предназначен для определения массовой доли (%) ДНК трансгенной сои от всей ДНК сои в продуктах питания и кормах для животных методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Количественное определение ДНК генетически модифицированной сои методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией включает в себя три этапа: экстракцию ДНК из образцов продуктов питания и кормов для животных, амплификацию фрагментов ДНК и гибридизационно-флуоресцентную детекцию, которая производится непосредственно в ходе ПЦР (формат FRT) c использованием зондов TaqMan.

В ходе анализа обнаруживаются следующие фрагменты ДНК:

последовательность промотора 35S вируса мозаики цветной капусты (P-35S CamV) и эндогенный контроль (ЭК сои), то есть ген, специфичный для сои (как трансгенной, так и нетрансгенной), что позволяет определять присутствие ДНК сои в исследуемом образце.

Относительное количество ГМ сои определяют с использованием калибровочной Формат FRT Форма 2: REF R-G2-M(RG,iQ,Dt,Ank) / VER 08.10.12 / стр. 3 из прямой, для построения которой при каждой постановке анализа тестируют калибровочные стандарты. Набор реагентов «АмплиКвант ГМ соя-FL» комплектуется калибровочными стандартами, представляющими собой препараты ДНК с соотношением последовательностей P-35S CamV и ЭК сои, соответствующим содержанию ГМО 0,1 %, 1 % и 5 %. Калибровочные стандарты необходимо тестировать в двух повторах.

ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ

Набор реагентов выпускается в 1 формате.

Формат FRT Набор реагентов выпускается в 3 формах комплектации:

Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-C» вариант 50, «ПЦРкомплект» вариант FRT-50 F.

Форма 2 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F.

Форма 3 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.

ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с формой 2 гарантируются только в случае применения дополнительного комплекта реагентов «ДНК-сорб-C» производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.

последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам.

ВНИМАНИЕ! Использование формы комплектации 3 производится только в соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.



АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Аналитические характеристики оценивались с использованием набора для экстракции «ДНК-сорб-С», комплекта для амплификации и детекции «ПЦРкомплект» вариант сертифицированных стандартов и рекомбинантных препаратов ДНК.

Аналитическая специфичность Формат FRT Форма 2: REF R-G2-M(RG,iQ,Dt,Ank) / VER 08.10.12 / стр. 4 из Аналитическая чувствительность Предел детекции (Limit of detection, LOD) Предел количественного определения (Limit of quantification, LOQ) Линейный диапазон количественной оценки Точность (Trueness) Повторяемость Воспроизводимость

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярнобиологические (ПЦР) исследования продуктов, содержащих растительные компоненты или растительное сырье, с соблюдением санитарно-эпидемических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН 2.1.7.2790- медицинскими отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности».

При работе всегда следует выполнять следующие требования:

- Следует организовывать работу и хранение исследуемых образцов в соответствии с патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность возбудителями паразитарных болезней».

Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Выделения, продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, оборудование и реактивы в зону, в которой была проведена предыдущая стадия оценивается с помощью относительного стандартного отклонения повторяемости, RSDr оценивается с помощью относительного стандартного отклонения воспроизводимости, RSDR Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790- Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».

ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов.

Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции.

Допускать к работе с набором только специально обученный персонал.

Не использовать набор по истечении срока годности.

Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки по окончании работы.

Избегать контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. При контакте немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской Листы безопасности материалов (MSDS – material safety data sheet) доступны по запросу.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

ЗОНА 1.

Для выделения ДНК из проб требуются:

1. Ламинарный бокс (например, «БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2», «Ламинарные системы», Россия, класс биологической безопасности II тип А).

2. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например, «ТЕРМО 24Биоком», Россия).

3. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 16 тыс об/мин (например, MiniSpin, Eppendorf, Германия).

4. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия).

5. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», г. Ульяновск, Россия).

6. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, «Ленпипет», Россия).

7. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся Формат FRT Форма 2: REF R-G2-M(RG,iQ,Dt,Ank) / VER 08.10.12 / стр. 6 из пробирки объемом 1,5 мл (например, Axygen, США).

8. Штативы для пробирок объемом 1,5 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия) и наконечников (например, Axygen, США).

9. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до мкл (например, Axygen, США).

10. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл (например, Axygen, США).

11. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С.

12. Отдельный халат и одноразовые перчатки.

13. Емкость с дезинфицирующим раствором.

ЗОНА 2.

Для проведения реакций обратной транскрипции и ПЦР-амплификации, а также гибридизационно-флуоресцентной детекции продуктов ПЦР-амплификации требуются:

1. Амплификатор, например, Rotor-Gene 3000/6000 (Corbett Research, Австралия);

Rotor-Gene Q (Qiagen, Германия); iQ iCycler, (Bio-Rad, США); «ДТ-96» («ДНКТехнология», Россия), «АНК-16»/«АНК-32» (ЗАО «Синтол», Россия) или эквивалентный.

2. ПЦР-бокс (например, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», «Ламинарные системы», Россия).

3. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия).

4. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, «Ленпипет», Россия).

5. Для прибора Rotor-Gene: одноразовые полипропиленовые пробирки для ПЦР на 0,2 мл (плоская крышка, нестрипованные) (например, Axygen, США).

полипропиленовые пробирки для ПЦР на 0,2 мл (куполообразная крышка) (например, Axygen, США), стрипованные пробирки с куполообразной крышкой или 96-луночный планшет для ПЦР, снабженный термостабильными оптически прозрачными пленками (например, Bio-Rad, США).

6. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до 200 мкл (например, Axygen, США).

7. Штативы для наконечников (например, Axygen, США) и пробирок объемом 0,2 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия).

8. Холодильник от 2 до 8 °С.



Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |
 



Похожие работы:

«ДОПОЛНЕНИЕ К DOC 8632 ПОЛИТИКА ИКАО ПО ВОПРОСУ НАЛОГООБЛОЖЕНИЯ В ОБЛАСТИ МЕЖДУНАРОДНОГО ВОЗДУШНОГО ТРАНСПОРТА (Издание третье – 2000) ПОПРАВКА № 1 Прилагаемая поправка к Дополнению включает полученную от Договаривающихся государств информацию об их 1. позиции в отношении объединенной резолюции по вопросу налогообложения в области международного воздушного транспорта по состоянию на 31 декабря 2006 года. Для включения настоящей поправки: замените существующие страницы (iii) и (iv) новыми...»

«ШТАБ ГРАЖДАНСКОЙ ОБОРОНЫ СССР КОМИТЕТ ГИДРОМЕТЕОРОЛОГИИ ПРИ КАБИНЕТЕ МИНИСТРОВ СССР МЕТОДИКА ПРОГНОЗИРОВАНИЯ МАСШТАБОВ ЗАРАЖЕНИЯ СИЛЬНОДЕЙСТВУЮЩИМИ ЯДОВИТЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ ПРИ АВАРИЯХ (РАЗРУШЕНИЯХ) НА ХИМИЧЕСКИ ОПАСНЫХ ОБЪЕКТАХ И ТРАНСПОРТЕ РД 52.04.253-90 САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2000 ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Ордена Трудового Красного Знамени Главной геофизической обсерваторией им. А.И. Воейкова и Штабом Гражданской обороны СССР с использованием результатов Государственного...»

«ТЕОРИЯ СЛУЧАЙНЫХ ПРОЦЕССОВ ПОСОБИЕ по выполнению курсовой работы Стохастические процессы в системах со случайной структурой для студентов III курса специальности 230401 дневного обучения Москва – 2009 Рецензент: канд. физ.-мат. наук, доц. М.С. Аль-Натор Кузнецов В.Л. Теория случайных процессов Пособие по выполнению курсовой работы Стохастические процессы в системах со случайной структурой М.: МГТУГА, 2009.-19 с. В пособии приведены задания для выполнения курсовой работы Стохастические процессы...»

«Министерство Защиты Окружающей Среды Израиля Центр Экологических Систем и Технологий (ЭКОСТ) АВТОТРАНСПОРТ И ЭКОЛОГИЯ ГОРОДОВ ИЗРАИЛЯ Пособие для русскоязычных репатриантов При финансовой поддержке Министерства Защиты окружающей среды При поддержке: * Министерства Абсорбции Израиля * Муниципалитета Иерусалима * Управления Абсорбции Муниципалитета Иерусалима * Иерусалимского Общинного Дома Иерусалим, 2012 2 Авторский коллектив: Д-р. Валерий Анфимов- Введение, главы 1-7, 8,10,12-15. M.Sc. Елена...»

«ПЕРЕЧЕНЬ ДЕЙСТВУЮЩИХ НОТАМ Cледующие НОТАМ действуют по состоянию на 06 марта 2014 0500 UTC НОТАМ, не включенные в перечень, аннулированы, или срок их действия истек, или внесены в АИП книга 4 очередной Поправкой   СЕРИЯ Д  (Д0013/13 НОТАМН Щ)УЕЕЕ/ЩПИЬЬ/И/НБО/А/000/999/6022С13426В015 А)УЕМУ Б)1303070900 Ц)ПОСТ Е)ВМЕСТО КООРДИНАТ ТРЕТЬЕГО РАЗВОРОТА: N601205.3 E1341811.1 4ИТАТЬ N601252.9 E1342055.7. ВМЕСТО КООРДИНАТ 4ЕТВЕРТОГО РАЗВОРОТА: N601319.5 E1341258.8 4ИТАТЬ N601407.1 E1341543.3. ДЛЯ ВС СО...»

«ЖЕЛЕЗНОДОРОЖНЫЙ ТРАНСПОРТ L. LOTKER - Common Component (Deutschland, Berlin) С. GUL - Common Component (Deutschland, Berlin) ИНФОРМАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ ГРУЗОВЫХ ПЕРЕВОЗОК Аннотация Проект предлагает и реализует идею общего языка (рисунок 3) в отличие от идеи общей функциональности. Каждому участнику группы Common Component, равно как и любому другому участнику транспортного рынка, предполагающему использовать данную платформу, оставлено право выбора присоединиться к существующей и/или...»

«© Honda Motor Co., Ltd. 2006 ВАЖНАЯ ИНФОРМАЦИЯ КОНСТРУКЦИЕЙ ДАННОГО МОТОЦИКЛА ПРЕДУСМОТРЕНО ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО В СПОРТИВНЫХ СОСТЯЗАНИЯХ, ВСЛЕДСТВИЕ ЧЕГО НА НЕГО НЕ РАСПРОСТРАНЯЕТСЯ ДЕЙСТВИЕ ГАРАНТИИ. ДАННЫЙ МОТОЦИКЛ НЕ СООТВЕТСТВУЕТ ТРЕБОВАНИЯМ СТАНДАРТОВ ПО БЕЗОПАСНОСТИ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫМ К ТРАНСПОРТНЫМ СРЕДСТВАМ, КОТОРЫЕ ПРЕДНАЗНАЧЕНЫ ДЛЯ ЭКСПЛУАТАЦИИ НА ДОРОГАХ ОБЩЕГО ПОЛЬЗОВАНИЯ, ВСЛЕДСТВИЕ ЧЕГО ЭКСПЛУАТАЦИЯ ДАННОГО МОТОЦИКЛА НА ДОРОГАХ ОБЩЕГО ПОЛЬЗОВАНИЯ КАТЕГОРИЧЕСКИ ЗАПРЕЩЕНА....»

«Республиканское унитарное предприятие БЕЛГИПРОЛЕС НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ИНФОРМАЦИЯ В ЛЕСНОМ ХОЗЯЙСТВЕ ВЫПУСК № 9 Минск 2004 1 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ЛЕСНОМУ ХОЗЯЙСТВУ НАСТАВЛЕНИЕ ПО ЛЕСОСЕМЕННОМУ ДЕЛУ Москва – 1980 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ I. ПОСТОЯННАЯ ЛЕСОСЕМЕННАЯ БАЗА И ЛЕСОВОДСТВЕННАЯ ЦЕННОСТЬ СЕМЯН. 6 II. ФЕНОЛОГИЧЕСКИЕ НАБЛЮДЕНИЯ И УЧЕТ ПЛОДОНОШЕНИЯ III. СБОР, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВКА ШИШЕК, ПЛОДОВ И СЕМЯН. 13 Предварительное обследование лесосеменных объектов перед...»

«Утверждена Постановлением Правительства Российской Федерации от 5 декабря 2001 г. N 848 ФЕДЕРАЛЬНАЯ ЦЕЛЕВАЯ ПРОГРАММА РАЗВИТИЕ ТРАНСПОРТНОЙ СИСТЕМЫ РОССИИ (2010 - 2015 ГОДЫ) (в ред. Постановлений Правительства РФ от 20.05.2008 N 377, от 22.04.2010 N 278, от 12.10.2010 N 828, от 21.12.2010 N 1076, с изм., внесенными Постановлениями Правительства РФ от 21.12.2009 N 1035, от 22.12.2010 N 1088) ПАСПОРТ ФЕДЕРАЛЬНОЙ ЦЕЛЕВОЙ ПРОГРАММЫ РАЗВИТИЕ ТРАНСПОРТНОЙ СИСТЕМЫ РОССИИ (2010 - 2015 ГОДЫ)...»

«КАТАЛОГ ДЕТАЛЕЙ И СБОРОЧНЫХ ЕДИНИЦ ЧАСТЬ 6 РАДИОЭЛЕКТРОННОЕ ОБОРУДОВАНИЕ Главы 61-64 КАТАЛОГ ДЕТАЛЕЙ И СБОРОЧНЫХ ЕДИНИЦ ПЕРЕЧЕНЬ ГЛАВ КАТАЛОГА Номер Наименование главы ВВЕДЕНИЕ Часть I - УКАЗАНИЯ ПО ОБЩЕМУ ОБСЛУЖИВАНИЮ Хранение самолета Сназемное оборудование) 12 Часть 2 - ПЛАНЕР. Книга I Общие указания 20 21 Фюзеляж Часть 2 - ПЛАНЕР. Книга 2 Двери и люки 22 Окна 23 Оперение 25 Пилоны 26 Часть 2. - ПЛАНЕР. Книга 3 Крыло (включая раздел 24.43.00) 24 Часть 2 - ПЛАНЕР. Книга 4 Крыло (с раздела...»






 
© 2013 www.knigi.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.