WWW.KNIGI.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 10 |

«Учебно-методический комплекс Дисциплина Биохимия и молекулярная биология Блок дисциплин Б.3.Б3.2 Профессиональный цикл. Направление подготовки 020400.62 Биология ...»

-- [ Страница 2 ] --

Фильтрат, содержащий натриевую соль казеина, снова осаждают 0,1-% раствором уксусной кислоты (или концентрированной). Осадок казеина отфильтровывают, отжимают между листами фильтровальной бумаги досуха и растирают для обезвоживания в ступке со спиртом (15-20 мл). Затем казеин встряхивают в большой пробирке сначала с эфиром, а затем с метиловым спиртом и хлороформом (1:1). Казеин сушат на воздухе.

Чистый казеин представляет собой белый порошок.

2. Определение изоэлектрической точки казеина.

Являясь амфотерными электролитами, белки диссоциируют с образованием как положительно, так и отрицательно заряженных групп. При определенном рН среды можно добиться такого соотношения ионизированных групп, при котором белковый раствор наименее устойчив и белок выпадает в осадок. Испытывая поведение белка при различных концентрациях водородных ионов в растворе, находят значение рН среды, соответствующее изоэлектрической точке белка.

Оборудование, реактивы. ФЭК; баня водяная; пробирки стеклянные; пипетки на 1, 2 и мл; колба мерная на 200 мл; уксусная кислота (0,1н); казеин; ацетат натрия (0,1 н).

Ход работы.

1. Готовят 0,1% раствор казеина: 0,2 г казеина растворяют при небольшом нагревании на водяной бане в 5 мл 0,1 н ацетата натрия. Доводят полученный раствор до объема 200 мл раствором ацетата натрия той же концентрации.

2. В пять пробирок приливают:

Наблюдают за степенью помутнения в каждой пробирке. Там где помутнение максимальное, рН раствора соответствует изоэлектрической точке белка. Степени фотоэлектроколориметре (длина волны 540 нм, рабочая ширина кюветы 10мм).

3. Определение наличия остатка фосфорной кислоты.

Оборудование, реактивы. Баня песочная; казеин (0,05г); серная кислота (конц); азотная кислота (конц); бумага фенолфталеиновая; гидроксид натрия (5н); раствор молибдата аммония в азотной кислоте; аммиак (конц); магнезиальная смесь.

Ход работы.

В 100 г казеина содержится примерно 0,8 г фосфора в составе фосфорной кислоты.

Обнаружение фосфора в казеине осуществляется сжиганием казеина в смеси концентрированных серной и азотной кислот.

Навеску казеина (0,05 г) смешивают в тугоплавкой пробирке с 0,3 мл (5 капель) концентрированной серной кислоты и таким же количеством азотной кислоты. Пробирку нагревают в песочной бане. Смесь обугливается, а при дальнейшем нагревании принимает бурую окраску. Через 10 мин, если раствор не обесцветится, добавляют ещё капли азотной кислоты и продолжают нагревание. Так поступают и дальше, пока смесь не обесцветится. Затем добавляют 2 мл воды и продолжают нагревание для удаления оставшейся азотной кислоты. После этого смесь нейтрализуют по фенолфталеиновой бумаге, прибавляя по каплям 5 н. Раствор гидроксида натрия.

Раствор делят на две части и проверяют наличие в нем фосфорной кислоты молибдатом аммония и магнезиальной смесью.

К 2 мл раствора молибдата аммония в азотной кислоте прибавляют 1 мл испытуемого раствора. Смесь слегка нагревают. Образуется желто-зеленый осадок фосфоромолибдата аммония (NH4)3PO4·12MoO К 2 мл гидролизата постепенно прибавляют концентрированный раствор аммиака до резкого запаха, после чего добавляют равный объем магнезиальной смеси. Образуется кристаллический осадок (потирание стеклянной палочки) фосфата магний-аммония MgNH4PO4.

Контрольные вопросы:

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №

Количественное определение белков. Количественное определение белка по биуретовой реакции, спектрофотометрическим методом, с Цель: Формирование ОК- 8 ; ПК-4,5.

Образовательные технологии: Объяснительно-иллюстративные технологии, технология полного усвоения.

Задания для самостоятельной работы студентов:

1.Подготовить доклад или реферат 2.Прочитать учебник:

Биологическая химия. Д.Г. Кнорре, С.Д. Мызина, М: Высшая школа, 2000.

Молекулярная биология. А.С. Коничев, Г.Л. Севастьянова, М: Академия, 2003.

Основы биохимии. Ю.Б. Филиппович, М: Высшая школа, Решение задач на строение белковой молекулы; на молекулярную массу белка; на свойства аминокислот.

Формы контроля самостоятельной работы студентов: устный опрос, анализ рефератов.

Формы текущего контроля знаний и освоенных компетенций: устный опрос, анализ решения задач.

Литература:

1. Биохимия человека. Р. Марри и др., М: Мир, 1993, в 2-х томах 2. Биохимия растений. В.Л. Кретович, М: Высшая школа, 1980, 3. Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка. А.С. Спирин, М:

Высшая школа, 1986.

4. Биохимия. В.П. Комов, В.Н. Шведова. М.: Дрофа, 2004. 638 с.

5. Биохимия и молекулярная биология В. Элиот, Д. Элиот. М.: МАИК, 2002. 446с.

6. Наглядная биохимия. Я. Кольман, К.-Г. Рём. М.: Мир, 2004.

Цель работы: освоить методы определения концентрации белка в растворе.

Задачи:

1. Определить концентрацию белков сыворотки крови биуретовым методом;

2. Определить концентрацию белков сыворотки крови спектрофотометрическим методом.

3. Определить концентрацию белков сыворотки крови спектрофотометрическим методом.

Ход работы.

1. Количественное определение белка по биуретовой реакции Методика Горналла, Бардавилла и Дэвиса Биуретовая реакция белков не отличается высокой чувствительностью. Поэтому она применяется в тех случаях, когда содержание белка в исследуемом образце достаточно велико (не ниже нескольких миллиграммов на миллилитр).

Оборудование, реактивы. Фотоэлектроколориметр; пробирки стеклянные; пипетки на 1, 2 и 10 мл; гидроксид натрия (10%); хлорид натрия (1-%); биуретовый реактив; сыворотка крови; стандартный раствор белка – 10мг белка в 1 мл воды (раствор казеина); карбонат натрия (0,1 %); соляная кислота (0,1 н).

Ход работы.

1. Готовят стандартный раствор белка – казеина (10 гм белка в 1 мл воды). Навеску казеина растворяют в небольшой порции 0,1% карбоната натрия при осторожном нагревании, разбавляют дистиллированной водой и осторожно (чтобы не произошла денатурация белка) нейтрализуют 0,1 н соляной кислотой.

2. Готовят серию растворов, как указано в таблице.

Таблица. Разведение стандартного раствора белка. Растворы содержат от 2 до 10 мг белка.

комнатной температуре и фотометрируют в кюветах (длина 1 см) при 540 нм против пробы номер 1. По полученным значениям строят калибровочную кривую.

4. 1 мл сыворотки разводят 1% раствором хлорида натрия в 10 раз. К 1 мл разведенного раствора, приливают 8 мл биуретового реактива перемешивают и оставляют стоять мин. Фотометрируют против контроля при 540 нм. По калибровочному графику определяют содержание белка в пробе и выражают его далее с учетом разведения в процентах в целом препарате.

2. Спектрофотометрический метод определения концентрации белка Методика Варбурга и Кристиана Метод основан на способности ароматических аминокислот (триптофана, тирозина и в меньшей степени фенилаланина) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом при 280 нм. Измеряя величину оптической плотности при этой длине волны, находят количество белка в растворе. Поскольку белки отличаются по содержанию ароматических аминокислот, их поглощение в ультрафиолетовой области спектра может сильно различаться. Условно считают, что при концентрации «усредненного» белка в растворе, равной 1мг/мл, величина оптической плотности при 280 нм равна 1,0 (при толщине слоя жидкости в 1 см).

Определению белка данным методом мешает присутствие нуклеиновых кислот и нуклеотидов. Измеряют оптическую плотность раствора при 260 нм (А260) (для учета поглощения соединений нуклеотидной природы) и 280 нм (А280) на спектрофотометре.

Вычисление концентрации белка:

1. Вычисляют отношение А280/А260. С помощью таблицы находят множитель f, соответствующий данному соотношению.

2. Содержание белка можно найти по формуле Калькара:

Таблица. Множитель f для вычисления концентрации белка.

Работают с рефрактометром следующим образом:

Раскрывают камеру с призмами, тщательно ополаскивают призмы водой, промокают фильтровальной бумагой и окончательно высушивают, протирая призмы ватой, смоченной смесью спирта и эфира (1:1). Стеклянной палочкой наносят на нижнюю призму 2 капли дистиллированной воды и закрывают камеру. Устанавливают рефрактометр так, чтобы призмы его были ярко освещены. Если граница тени окрашена и расплывчата, поворотом рукоятки ахроматора добиваются четкости и бесцветности границы. Поворотом призм или окуляра рефрактометра подводят границу темного поля к перекрестку нитей окуляра. Делают отсчет по шкале. При температуре 200С отсчет должен быть 1,333 (показатель преломления воды при 200С). Это значит, что прибор готов к работе. После этого, камеру раскрывают, воду удаляют фильтровальной бумагой и сушат призмы с помощью спирта и эфира. На нижнюю призму наносят каплю сыворотки крови, закрывают камеру и делают отсчет. По таблице находят процентное содержание белка в сыворотке крови. По окончании работы смывают водой с призм прибора сыворотку, удаляют воду бумагой и осушают призмы спирто-эфирной смесью. На нижнюю призму накладывают кусочек фильтровальной бумаги и закрывают камеру.

Если во время отсчета температура была не равна 200С, то в полученное значение показателя преломления вносят поправку 0,0001 на каждый градус. В случае более низкой температуры поправку вычитают, более высокой – прибавляют.

Контрольные вопросы.

2.Физико-химические свойства белков.

3.От чего зависит растворимость белков?

4.Какие факторы стабилизируют белки в растворе?

5.Каковы общие принципы осаждения белка из раствора?

6.Растворимость белков при низкой концентрации соли (изоэлектрическое осаждение).

7.Осаждение белков органическими растворителями.

8.Каким способом можно осадить белки из раствора, не вызывая их денатурации?

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №

Количественное определение белков. Выделение и очистка препаратов глобулинов и альбуминов белка куриных яиц методом высаливания сульфатом аммония и диализом. Качественные реакции Цель: Формирование ОК- 8 ; ПК-4,5.

Образовательные технологии: Объяснительно-иллюстративные технологии, технология полного усвоения.

Задания для самостоятельной работы студентов:

1.Подготовить доклад или реферат 2.Прочитать учебник:

Биологическая химия. Д.Г. Кнорре, С.Д. Мызина, М: Высшая школа, 2000.

Молекулярная биология. А.С. Коничев, Г.Л. Севастьянова, М: Академия, 2003.

Основы биохимии. Ю.Б. Филиппович, М: Высшая школа, Решение задач на строение белковой молекулы; на молекулярную массу белка; на свойства аминокислот.

Формы контроля самостоятельной работы студентов: устный опрос, анализ рефератов.

Формы текущего контроля знаний и освоенных компетенций: устный опрос, анализ решения задач.

Литература:

4. Биохимия человека. Р. Марри и др., М: Мир, 1993, в 2-х томах 5. Биохимия растений. В.Л. Кретович, М: Высшая школа, 1980, 6. Молекулярная биология. Структура рибосомы и биосинтез белка. А.С. Спирин, М:

Высшая школа, 1986.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 10 |
 


Похожие работы:

«БИКБУЛАТОВ РУСТЕМ РАИСОВИЧ ГОМОЛИТИЧЕСКИЕ ЖИДКОФАЗНЫЕ ПРЕВРАЩЕНИЯ АЛКИЛГИПОХЛОРИТОВ Органическая химия 02.00.03АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Уфа 1997 www.sp-department.ru Работа выполнена на кафедре биохимнн и техно.1огнн микробиологиче­ ских производств У фимекого государствеююго нефтяного тех~ШЧеского уни­ верспrета, в Научно-исследовательском институте малотоннажных химических продуктов и реактивов НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ: доктор химических наук,...»

«Согласовано Рассмотрено Утверждаю на заседании методического на заседании методического Директор МБОУ Лицей №2 объединения гуманитарного совета _Т.Р.Фарберова цикла _ _ Протокол №_ Протокол №_ Приказ № _ 2013г. от _ _2013г. от _ _2013г. Рабочая программа по учебному предмету Химия 8 класс 2013 – 2014 учебный год Составитель: Хисамова А.В., учитель биологии и химии Нижневартовск 2013 СОДЕРЖАНИЕ 1) Пояснительная записка. 2) Общая характеристика учебного предмета, курса. 3) Описание места...»

«Организация внеклассных экспериментальных исследований Ж.А.Цобкало, магистр естественных наук, учитель химии СШ № 83 г. Минска; Д.И.Мычко, кандидат химических наук, доцент кафедры неорганической химии Отличительной чертой современного этапа развития школьного химического образования является изменение приоритетов в целях образования. В центр учебно воспитательного про цесса ставится задача обучения умению применять знания в незнакомой ситуации и для ре шения нового круга задач, обучение умению...»

«АННОТИРОВАННЫЙ ТЕМАТИЧЕСКИЙ ПЛАН ВЫПУСКА НАУЧНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ СО РАН на 2012-й год НОВОСИБИРСК ИЗДАТЕЛЬСТВО СИБИРСКОГ О ОТ Д Е Л Е Н И Я РОССИЙСКОЙ АКАД ЕМ ИИ Н А У К 2012 УДК 017.42 ББК 91 А 68 Аннотированный тематический план выпуска научной литературы СО РАН на 2012-й год. – Новосибирск: Издательство А 68 СО РАН, 2012. – 75 с. Темплан предназначен для академических и отраслевых научных учреждений, учебных заведений, библиотек, бибколлекторов, научно-производственных объединений, крупных...»

«Научная библиотека Справочно-библиографический отдел Башков Александр Степанович Биобиблиографический указатель научных и методических работ за 1967–2012 гг. 2-е издание, дополненное и исправленное Ижевск ФГБОУ ВПО Ижевская ГСХА 2012 УДК 016:[631.8+631.4](092) ББК 91.9:40.4 Б 33 Составитель Чистякова Марина Георгиевна – библиограф справочно-библиографического отдела НБ ФГБОУ ВПО Ижевска ГСХА; Научный редактор Башков Александр Степанович Б 33 Башков Александр Степанович : биобиблиографический...»

«ПРОГРАММА вступительного испытания по направлению подготовки 35.06.01 – сельское хозяйство для поступающих на обучение по программам подготовки научно-педагогических кадров в аспирантуре (поступающие на данное научное направление подготовки имеют возможность в процессе обучения защитить диссертацию на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук по следующим научным специальностям: 06.01.01 - общее земледелие, растениеводство; 06.01.04 – агрохимия; 06.01.05 - селекция и...»

«2.3. КЛАСТЕР НАНОХИМИЯ И ЭКОЛОГИЯ Целью образования кластера является координирование научно-исследовательской и инновационной деятельности 11 учебно-научных лабораторий химического отделения Института естествознания, комплексного и более продуктивного использования закупаемого в 2008 году научного оборудования в рамках реализации ИОП, рост качества подготовки специалистов посредством повышения уровня аудиторной работы, научно-исследовательской деятельности студентов и преподавателей на...»

«Рекомендуемая литература по учебной дисциплине Иностранный язык (немецкий) № п/п Краткое библиографическое описание Электронный Гриф Полочный Кол-во экз. индекс 1) Wir lernen deutsch sprechen : темат. словарь-минимум по нем. языку / Иркут. Ш143.24 73 экз. гос. техн. ун-т. - Иркутск : Изд-во ИрГТУ, 2007. - 67 с. W76 2) Ардова Вера Владимировна Ш143.24 188 экз. Учебник немецкого языка : для заоч. техн. вузов / В. В. Ардова, Т. В. А79 Борисова, Н. М. Домбровская. - 4-е изд., испр. - М. : Высш....»

«ОЧЕРКИ ПО ОЗЕРОВЕДЕНИЮ ВТОРАЯ ЧАСТЬ Ч f I Б И&Л и О Г Е КА | Лз^-КГР'-'.ДСНвГО | Гидрокея ор.;;:сгического Института гимиз ГИДРОМЕТЕОРОЛОГИЧЕ'СКОЕ ИЗДАТЕЛЬСТВО ЛЕНИНГРАД. 1960 -АННОТАЦИЯ.. В книге рассматриваются некоторые вопросы общего озероведения, касающиеся озерного лОжа (морфология и морфометрия, донные отложения), химических свойств озерных вод, испарения, водного баланса, уровня, волнения и динамики прибрежной области. Книга предназначена для научных работников и инженеров,...»

«В монографии представлен подход к мелиоративному проектированию комплексных мелиораций с позиции генетического почвоведения. На примере пойменных почв южнотаежной подзоны в пределах Томской области рассматриваются преимущества данного подхода в мелиорации. Проведенные исследования на 4 экспериментальных мелиоративных системах в поймах рр. Оби, Томи, Чулыма, Кии позволили детальнорассмотреть режимы почв (гидротермический окислительновосстановительный,агрохимический, биологический,...»






 
© 2013 www.knigi.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.