WWW.KNIGI.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     | 1 |   ...   | 11 | 12 || 14 | 15 |   ...   | 49 |

«Т. Г. Волова БИОТЕХНОЛОГИЯ Ответственный редактор академик И. И. Гительзон Рекомендовано Министерством общего и профессионального образования Российской Федерации в ...»

-- [ Страница 13 ] --

Культивирование осуществляется в строго стерильной глубинной аэробной периодической культуре в аппаратах объемом 50 и 100 м3 при коэффициенте заполнения 0.75. Процесс длится 48–72 ч при 29–30°С, контролируемом рН 7.0–7.5, непрерывном перемешивании и избыточном давлении 20–30 кПа. Уровень аэрации составляет 1м3 воздуха/м3 среды в минуту. При ухудшении условий аэрации происходит образование молочной кислоты.

Для пеногашения используют кашалотовый жир или синтетические масла (0.5 % от объема среды). В первые сутки потребляется около 25 % сахаров и почти все аминокислоты, при этом образуется практически вся биомасса.

Далее на фоне резкого снижения скорости роста клеток наблюдается самая высокая скорость синтеза лизина (до 1.0 г/л ч). Для стабилизации рН периодически проводят поддтитровку культуры 25 % раствором аммиака. При дополнительном дробном введении в аппарат углеводов и азота выход лизина можно повысить. Конечная концентрация кислоты достигает 40 г/л при остаточной концентрации сахаров около 0.5–1.0 г/л.

Эффективный процесс получения лизина реализован на более доступном субстрате – уксусной кислоте. Токсичность данного субстрата делает необходимой дробную подачу ацетата; его концентрация в среде не должна превышать 2 %. Небольшие добавки сахара в среду (около 1 %) повышают выход лизина на 30–50 %. Экономический коэффициент по потребляемому ацетату при этом составляет 27 %. Конечная концентрация лизина в среде достигает 40–50 г/л. В последние годы получены мутантные штаммы B. flavum, обеспечивающие на ацетатной среде выход лизина до 73 г/л.

Практически весь производимый микробиологическим способом Lлизин используется в кормопроизводстве для повышения усвояемости и питательности кормов. Поэтому выпускается лизин, главным образом, в виде кормовых препаратов – жидкого концентрата лизина (ЖКЛ) и кормового концентрата лизина (ККЛ).

При производстве ЖКЛ культуральную жидкость, предварительно стабилизированную 25 % раствором гидросульфита натрия, подкисляют соляной кислотой до рН 4.5–5.0. Образующийся при этом термостабильный монохлорид лизина упаривают в вакуумно-выпарных аппаратах до 40 % содержания сухих веществ. Готовый препарат ЖКЛ не замерзает при температуре до –18°C и сохраняет свои свойства в течение 3 месяцев.

ККЛ получают на основе ЖКЛ, высушивая жидкий концентрат в распылительных сушилках при температуре не более 90°С до остаточной влажности 4–8 %. Сухой препарат лизина гигроскопичен и в процессе хранения подвержен порче. Для устранения данного нежелательного явления в концентрат перед высушиванием вводят наполнители в виде костной муки, бентоита, негашеной извести, пшеничных отрубей. Высушивание полученной пасты проводят конвективным способом на вальцеволенточных сушилках. Препарат по составу близок к жидкому концентрату лизина и содержит (в %): 7–10 лизина, 15–17 белка, до 14 других аминокислот, 10–13 бетаина и 20–25 зольных веществ. Препарат сыпуч и негигроскопичен. Срок его хранения возрастает до 1 года.

Технология получения триптофана L-Триптофан (-амино--индолилпропионовая кислота) относится к незаменимым аминокислотам:

Триптофан, наряду с другими ароматическими аминокислотами, фелиаланином и тирозином, в последние годы находит все большее применение. Отсутствие или дефицит триптофана в организме приводит к ряду тяжелых заболеваний (диабет, туберкулез, пеллагра). Используется триптофан в биохимических исследованиях, в небольших количествах – в животноводстве.

В общем виде последовательность биосинтетических реакций образования триптофана следущая:

эритрозо-4-фосфат + фосфоеноилпировиноградная кислота 7-фосфо-3-дезокси-D-арабиногептулозовая кислота 5-дегидрошикимовая кислота шикимовая кислота хоризмовая кислота антраниловая кислота триптофан.

Шикимовая кислота является основным промежуточным продуктом, из которого через 5-фосфо-3-енолпирувилшикимовую кислоту образуется хоризмовая кислота. Данная стадия является ключевой для синтеза ароматических аминокислот.

Микробиологический синтез L-триптофана осуществляют на основе мутантных штаммов дрожжей (Candida) и бактерий (E. coli, Bacillus subtilis), дефицитных по тирозину и фенилаланину. Промышленный синтез Lтриптофана осуществляется на основе сахаров. Исходная питательная среда для стерильного периодического выращивания дрожжей содержит (в %): сахароза 10, мочевина 0.5, кукурузный экстракт 2.0, а также хлорид кальция, калий фосфорнокислый и сульфат магния. Продолжительность периодической ферментации при 37°С не превышает 48 ч. В ходе постфертментационной стадии триптофан выделяют из культуры по обычным схемам. Для получения очищенного кристаллического препарата работают с культуральной жидкостью. Для получения кормового концентрата используют и биомассу клеток.

Двухступенчатое получение аминокислот из биосинтетических предшественников выбирают в тех случаях, когда предшественник недорог, а прямая микробная ферментация недостаточно экономична или разработана. При микробиологическом синтезе аминокислот из предшественников удается значительно понизить репрессию или ретроингибирование, так как в результате внесения в среду готового интермедиата снимаются проблемы, связанные с наличием генетического контроля в системе синтеза аминокислот.

При двухступенчатом способе получения глутаминовой кислоты из кетоглутаровой, играющей роль предшественника, необходим источник данного предшественника и ферментная система, катализирующая превращение кетоглутарата в целевую аминокислоту. Кетоглутарат получают микробиологическим синтезом на основе бактерий (Pseudomonas, Escherichia) или дрожжей (Candida) – I ступень. На II ступени можно получить L-глутаминовую кислоту в реакции восстановительного аминирования с помощью культуры Pseudomonas, имеющей сильную глутаматдегидрогеназу:



-кетоглутаровая кислота + NН4+ НАДН L-глутаминовая кислота + Н2О + НАД+.

L-глутаминговая кислота также может быть получена из кетоглутарата через переаминирование последней с участием трансамидазы:

-кетоглутаровая кислота + аминокислота L-глутаминовая кислота +-кетокислота;

II ступень по данной схеме может быть реализована культурой E.

coli, в качестве донора аминогрупп могут выступать аланин или аспарагиновая кислота.

Комбинированный, принципиально новый способ получения L-лизина в 1973 г. был предложен японской фирмой «Тойо Рейон» («Торей»). Конечный продукт, получаемый по данной технологии, отличается высокой концентрацией и чистотой. На первой стадии циклогексан в результате химических реакций превращается в циклический ангидрид лизина (D, Lамино--капролактам). На второй стадии осуществляют разделение оптических изомеров с помощью ферментов; происходящий при этом асимметрический гидролиз с участием гидролазы аминокапролактама приводит к образованию L-лизина. Гидролазу L--амино--капролактама синтезируют дрожжи (Candida, Trichospora, Cryptococcus), фермент стимулируется ионами марганца, магния и цинка. Источником рацемазы аминокапролактама могут служить бактерии (Flavobacterium, Achromobacter). Оба эти фермента, обладающие рацемазной и гидролазной активностями, в виде определенного количества биомассы вводят на II ступени в водный раствор предшественника – DL-аминокапролактама. В ходе ферментативных реакций из предшественника образуется L-лизин, чистота препарата – выше 99 %. Помимо микробной биомассы, источником превращений DLаминокапролактама в лизин могут служить изолированные иммобилизованные ферменты. Раствор предшественника пропускают через колонку, содержащую оба иммобилизованных фермента: один из них (гидролаза) гидролизует амидную связь в L-аминокапролактаме, не затрагивая Dформы предшественника; второй (рацемаза) – превращает D-изомер в рацемат с высокой скоростью. Выход L-лизина может составлять до 95 %.

L-триптафан также можно получать из предшественника – антраниловой кислоты. На первом этапе по традиционной микробиологической схеме с использованием дрожжей Candida utilis в течение 20–24 ч проводят процесс ферментации в условиях интенсивной (около 7 г О2/л.ч) аэрации.

Среда содержит мелассу (10.4 %), мочевину, сульфат магния, фосфаты калия. Для пеногашения используют кашалотовый жир и синтетические кремнеорганические соединения. Далее интенсивность аэрации снижают вдвое, в культуру периодически вносят растворы мочевины, мелассы и антраниловой кислоты. В течение 22–24 ч наращивают биомассу – источник ферментов; затем, в течение последующих 120 ч происходит собственно трансформация антраниловой кислоты в аминокислоту. Общее время процесса составляет около 140 ч, выход триптофана – 60 г/л.

Большие успехи в биотехнологии аминокислот были достигнуты с формированием методов инженерной энзимологии, в частности, с развитием техники иммобилизации ферментов.

Первым процессом промышленного использования иммобилизованных ферментов был процесс для разделения химически синтезированных рацемических смесей D- и L-форм аминокислот, разработанный в Японии в 1969 г. (предыдущие 15 лет процесс проводился компанией «Танабе Сейяку» с применением растворимых ферментов – аминоацилаз). В качестве исходного материала используют раствор ацилпроизводных синтезированных химическим путем LD-форм аминокислот, который пропускают через колонку с иммобилизированной L-аминоацилазой. Последняя гидролизует только ацил-L-изомеры, отщепляя от них объемную ацильную группу и тем самым резко увеличивает растворимость образующейся Lаминокислоты по сравнению с присутствующими в реакционной смеси ацил-D-изомерами. Далее смесь легко разделяется обычными физикохимическим методами. Компанией на промышленном уровне по данной технологии реализован синтез нескольких L-аминокислот, в том числе метионина, валина, фенилаланина, триптофана. Представляет интерес процесс получения аспарагиновой кислоты из химических предшественников (фумаровой кислоты и аммиака) на основе фермента аспартазы, разработанный японской фирмой «Танабе Сейяку». Фермент в одну стадию присоединяет молекулу аммиака к двойной связи фумаровой кислоты с образованием оптически активной L-аспарагиновой кислоты. Выход продукта составляет 99 %, процесс реализуется непрерывно в колонке объемом 1 м3. Производительность достигает 1700 кг чистой L-аспарагиновой кислоты в день на один реактор.

Дегидрогеназы аминокислот (лейцин- и аланиндегидрогеназы), катализирующие обратимые реакции дезаминирования, применяют в непрерывных процессах синтеза аминокислот из соответствующих кето-аналогов.

Глутаматсинтетаза, катализирующая АТФ-зависимую реакцию аминирования глутамата, используется для получения глутамина с 92 % выходом.

L-тирозин-фенол-лиаза, катализирующая реакцию элиминации, в которой тирозин распадается с образованием фенола, аммиака и пирувата, используется для энзиматического получения последнего. L-триптофан-индоллиаза может быть использована для получения L-триптофана из индола, пирувата и аммиака.

Высокая потребность в аминокислотах непрерывно стимулирует разработку принципиально новых и более эффективных биотехнологических способов их получения при наращивании темпов и объемов промышленного производства.

2.3. ОРГАНИЧЕСКИЕ КИСЛОТЫ Органические кислоты широко используют в пищевой и фармацевтической промышленности, в технике и в качестве химического сырья. Отдельные органические кислоты (лимонную, яблочную) можно получать экстракцией из природного растительного сырья; другие (уксусную, молочную) – в процессах органического синтеза. Более 50 органических кислот могут быть получены на основе микробиологического синтеза. Биотехнологические методы их получения к настоящему времени детально разработаны. Более того, принято считать, что органические кислоты, полученные в результате микробиологического синтеза, для использования человеком предпочтительнее в сравнение с синтетическими кислотами.



Pages:     | 1 |   ...   | 11 | 12 || 14 | 15 |   ...   | 49 |
 



Похожие работы:

«1. Лазерная хирургия глаукомы Ремесников И.А. - доклад в Ремесникова И.А ОКБ №1 г. Волгограда на обществе офтальмологов, 1997 г. 2. Применение компьютеризированной системы флюоресцентной ангиографии глазного дна Ремесников И.А. - доклад Ремесникова И.А в ОКБ №1 г. Волгограда на обществе офтальмологов, 1997 г. 3. Превентивная лазерная хирургия Ремесников И.А. - доклад на обществе офтальмологов в ВФ ФГБУ МНТК Микрохирургия глаза, 1998 г. 4. Лазертрабекулопластика как метод раннего лечения...»

«Главные темы № 20: 1. Наука о климате и современная климатическая дискуссия в обществе – интервью с заместителем директора Института глобального климата и экологии Росгидромета и РАН, членом бюро Межправительственной группы экспертов по изменению климата (МГЭИК), профессором С.М.Семеновым 2. Оценки последствий изменения климата для сельского хозяйства стран ЕС (проект Peseta) и России – комментарий ведущего научного сотрудника Всероссийского научноисследовательского института...»

«Welcome to the Fifth Dimension The Quintessence of Being, the Ascended Masters' Ultimate Secret Copyright @ 2010 by Diane LeBlanc. All rights reserved Все права зарезервированы, включая право на полное или частичное воспроизведение в какой бы то ни было форме. © София, 2010 ISBN 978-5-399-00146-3 © ООО Издательство София, 2010 Содержание Благодарности........................................... 7 Предисловие..........................»

«НАВИГАЦИОННЫЕ СИСТЕМЫ ЛЕТАТЕЛЬНЫХ АППАРАТОВ Ульяновск 2012 УДК 629.7.05 (076) ББК 32я7 Ш 55 Рецензент доцент кафедры Электроснабжение энергетического факультета Ульяновского государственного технического университета кандидат технических наук А. Е. Усачев Одобрено секцией методических пособий научно-методического совета университета Шивринский, В. Н. Ш 55 Навигационные системы летательных аппаратов : конспект лекций / В. Н. Шивринский. – Ульяновск : УлГТУ, 2012. – 148 с. Данное пособие знакомит...»

«Менеджмент безопасности и управление в чрезвычайных ситуациях На пути к геокосмической системе обеспечения человечества ресурсами и энергией Ворожихин Владимир Вальтерович Вольное экономическое общество Москвы Москва, Россия, vorozhikhin@mail.ru В статье рассматривается необходимость и возможность подго товки человечества к освоению ресурсов и энергии космоса. Зна чимость вопросов энергобезопасности постоянно растет. Пер спективным направлением развития энергетики является косми ческая энергия....»

«III. НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА 3.1. Штаты научного отдела 3.1.1. Списочный состав сотрудников научного отдела на 31.12.2004 Год Срок Специрож- Долность, научная работы в Ученая Ф.И.О. аль-нос Образование NN де-н специализация заповед- степень ть ия нике Зам. директора по Био- Ленинградский Корякин Александр научной работе, лог-зоо университет, с 1976 к.б.н 1 1954 Сергеевич орнитолог лог 1976 Ведущий научный Био- Ленинградский Бианки Виталий сотрудник, орни- лог-зоо университет, с 1955...»

«Мониторинг и анализ технологического развития России и мира №4, 4 кв. 2013 г. январь 2014 Исследование осуществлено в рамках программы фундаментальных исследований НИУ ВШЭ в 2014 году Содержание Технологические тренды в мире 1. Мировой технологический радар i. Мониторинг технологического развития в мире ii. Венчурные инвестиции iii. Технологические тренды в России 2. Технологический радар России i. Мониторинг технологического развития в России ii. Венчурные инвестиции в России iii. Новое в...»

«ЭКОНОМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ БИОЭНЕРГЕТИКИ, КАК ИСТОЧНИКА ДОХОДОВ АГРАРНЫХ ПРЕДПРИЯТИЙ ОКСАНА МАКАРЧУК, ХАЙНРИХ ХОКМАНН, АЛЕКСЕЙ ЛИССИТСА DISCUSSION PAPER NO. 111 2007 Theodor-Lieser-Strae 2, 06120 Halle (Saale), Germany Phone: +49-345-2928 110 Fax: +49-345-2928 199 E-mail: iamo@iamo.de Internet: http://www.iamo.de Оксана Макарчук – Аспирантка кафедры статистики и экономического анализа Национального аграрного университета, г. Киев, Украина. Главной темой научного исследования является анализ...»

«Компания АДЛ ООО Инженерная ООО ВИЛО РУС ООО Грундфос Компания Велес НП ИСЗС-Проект ООО Производственное ООО Данфосс НП ИСЗС-Монтаж объединение КЛИМАТВЕНТМАШ ООО КСБ ООО Мессе Дюссельдорф Москва ГУП Мосгаз ООО Мессе Франкфурт РУС ОАО Московская объединенная ОАО Московская ОАО Мосэнергосбыт энергетическая компания теплосетевая компания ЗАО МОССТРОЙ-31 ОАО Объединенная ООО Полимертепло энергетическая компания ЗАО Профайн РУС ЗАО РИФАР НП Росизол ЗАО НПФ Теплоком ООО Термафлекс Корпорация ЗАО...»






 
© 2013 www.knigi.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.