WWW.KNIGI.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     | 1 |   ...   | 18 | 19 || 21 | 22 |   ...   | 35 |

«'ч ж Ж у. ч № Ж v ^ jjif 'slfe * |j j | ф v j^ vj АЛМАГАМБЕТОВ К.Х. МЕДИЦИНСКАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ $$ ш® ф ф Ф ф Ф ШФ ш • ' ~§р ^Р 5$ s& Астана - 2009 щ УДК 60 БКК 52.81 ...»

-- [ Страница 20 ] --

Впервые возможность экспрессии одноцепочечных последова­ тельностей, составленных из вариабельных доменов антител в составе гибридного белка оболочки нитевидного фага, была про­ демонстрирована еще в 1990-х годах. Рекомбинантные антитела экспонируются на поверхности репродуцировавшихся модифици­ рованных нитевидных бактериофагов (каждый фаг несет один вариант антител). Далее эти антитела, гены которых закодированы

128 6. МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКЕ

в ДНК бактериофага-вектора, отбираются in vitro по способности взаимодействовать с антигеном.

Таким образом создание рекомбинантных антител нужной спе­ цифичности начинается с получения библиотеки клонов ДНК, встроенных в соответствующее число бактериофагов. Затем про­ водится биопаннинг (biopanning) - селекция бактериофагов, обла­ дающих большей аффинностью к иммобилизованным лигандам (специ ф и чески м антигенам ). Б иопаннингом или аффинной селекцией можно существенно обогатить исходную библиотеку бактериофагами, несущими на своей поверхности мини-антитела нужной специфичности, и затем из обогащ енной популяции отобрать фаги, несущие гены, кодирующие синтез мини-антител с нужными свойствами. Число клонов ДНК в составе одной фаговой библиотеки, созданной технологией фагового дисплея способно кодировать синтез разной специфичности антител, соизмеримых с их разнообразием в организме млекопитающего.

Метод фагового дисплея, относящийся к технологии рекомби­ нантной ДНК в отличие от гибридомной технологии позволяет сущ ественно повы ш ать аф финность синтезируемы х антител (оптимизировать сайты связывания с антигеном). Дополняя био­ паннинг повторением циклов отбора бактериофагов с использо­ ванием м идиф икации генов (использован ие ош ибаю щ ейся полимеразы или ПЦР-мутагенез, либо применяя направленный ПЦР-мутагенез гипервариабельных петель антител) можно еще более повысить аффинность и создать более эффективно связы­ вающиеся антитела.

Например, с помощью фагового дисплея получены антитела к аутоантигену —фактору некроза опухоли альфа (применяются эти антитела как антиревматоидное средство), к тканевому фактору роста бета (для терапии фиброзных болезней в офтальмологии), к опухолевому антигену и т.д.

С целью продукции рекомбинантных антител, модифицирован­ ную кДНК встраивают в векторы экспрессии и трансформируют ими подходящие клетки-хозяева (микроорганизмы,чаще E.coli или клетки млекопитающих).

Для синтеза полноразмерных рекомбинантных антител векторы экспрессируют в клетках млекопитающих. Только в эукариотичес­ 6.2. Технологии получения антител ких клетках возможна правильная сборка белковой молекулы и гликозилирование, необходим ое для вы полнения антителами эффекторных функций. Так, в лимфоидных клетках экспрессия химерных антител находится под контролем естественной сис­ темы регуляции —промоторы, энхансеры, факторы транскрипции.

Подобные системы регуляции в прокариотных клетках отсут­ ствуют. Полученный в результате отбора клон лимфоцитов, про­ дуцирующий рекомбинантные антитела культивируется в био­ ректоре.

В соврем енны х технологиях использую тся биореакторы с полыми волокнами, стенки которых образованы полупроницае­ мыми м ем бранам и. По волокнам циркулирует культуральная среда, компоненты которой проникают через полупроницаемые м ембраны в основной отсек, где находятся культивируемы е клетки, в нем собираются синтезируемые антитела, они не прони­ кают через полупроницаемую мембрану. Важным преимуществом данного метода культивирования является сравнительно высокая концентрация конечного продукта - антител Собранная куль­ туральная среда, содержащая продуцированные клетками анти­ тела, подвергается очистке аффинной, ионообменной и гельпроникаю щ ей хром атограф ией, чтобы получить вы сокоочищ енные белки —антитела.

Технология получения одноцепочечных антител к ДНК, отдельно кодирующие вариабельные домены легких и тяжелых цепей клонированного моноклонального антитела (VI и Vh -домены ), соединяются с химически синтезированным ДНКлинкером, кодирующим соединительный или линкерный белок (он соединяет между собой вариабельные домены легкой и тяжелой цепи м оновалентного, одноцепочечного антитела). Созданная генетическая конструкция встраивается в бактериофаг. С такого вектора в клетке-продуценте экспрессируется фрагмент с анти­ телом в формате scFv (участки Fv-фрагмента), соединенным с продуктом вирусного гена, т.е. с белком оболочки фага.

Наряду с бактериофагами в качестве вектора, трансфицируе­ мого в прокариотную клетку также используются плазмиды.

Векторная конструкция на основе плазмиды включает: промотор,

130 6. МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКЕ

лидер, CDR участки тяжелой и легкой цепи с подвижным линкером, соединяющим их, а также ген устойчивости к ампициллину (либо к другому антибиотику), сайт начала репликации.

В качестве продуцента одноцепочечных, мини-антител часто используется E.coli. Синтезируясь в кишечной палочке, химерный белок образует нерастворимые цитоплазматические включения.

Их растворяют в гуанидингидрохлориде и выделяют с помощью бы строго разведения и ан и он-обм ен н ой хроматографии (так получены белок СД4 специфичный к gp 120 ВИЧ и белок-экзо­ токсин А псевдомонад, т.е. иммунотоксин).

Сродство и специфичность (авидность и аффиность) к антигену у одн оц еп очечн ы х антител сходны с таковыми интактного, моноклонального антитела. Повышается аффиность мини-антител в сотни раз при помощи случайных мутаций на стадии П Ц Р амплификации с последующим отбором наиболее специфичных участков Fv-фрагментов. При всех неоспоримых достоинствах к ласси чески х одн оц еп оч еч н ы х м ини -ан ти тел они и м ею т и сущ ественный недостаток, обусловленны й тем, что являются моновалентными по отношению к антигену, в то время как при­ родные антитела - двухвалентны, то есть имеют два центра связы­ вания. Поэтому мини-антитела уступают по константам связы­ вания природным иммуноглобулинам, хуж е накапливаются на поверхности клеток-мишеней и слишком быстро выводятся из кровотока. В отличие от полноразмерных моноклональных антител мини-антитела не могут вовлечь в работу такие компоненты иммунной системы, как клетки-киллеры, или Т-лимфоциты, поскольку они не обладают константным доменом, ответственным за выполнение этой задачи.

6.3. Терапевтические антитела В настоящее время в лечебной практике применяется несколько десятков препаратов на основе моноклональных антител, являю­ щихся по механизму действия как антицитокинами, так и цитоток­ синами (к примеру, несущими радиоактивные изотопы или про­ тивоопухолевые вещества к клеткам-мишеням с определенным набором поверхностных антигенов).Механизмы действия моноТерапевтические антитела клональных антител на клетки-мишени многообразны; они вклю­ чают иммуноопосредованную (антитело- и комплементзависимую) цитотоксичность, стимуляцию фагоцитоза опухолевых клеток, блокаду рецепторов, способность непосредственно включать программу апоптоза, а также тормозить рост опухоли за счет блокады образования в ней новых кровеносных сосудов.

Особо важное значение имеет группа моноклональных антител, реагирующих только с опухолевыми клетками. Эти антитела можно использовать для необходимого токсического воздействия прицельно на опухоль, не затрагивая при этом здоровые ткани.

Адресное воздействие на опухолевые ткани - важнейшая проб­ лема фундаментальной медицины. Использование специфических антител для этих целей, вне всякого сомнения, является одним из наиболее перспективных подходов. Однако применение полно­ размерных мышиных антител in vivo имеет существенные ограни­ чения, связанные с тем, что они, будучи чужеродными белками, сами вызывают иммунный ответ в организме человека. Значитель­ ной части проблем удается избежать, если использовать химерное антитело (рис. 41) либо не целое антитело, а лишь его часть, необ­ ходимую для распознавания антигена, т.е. одноцепочечные, гуманизированные антитела.

Одноцепочечные антитела, обладая меньшими размерами, легче проникают в ткани, преодолевают гематоэнцефалический барьер, вызывают меньший неспецифический иммунный ответ.

Они применимы при доставке лекарственных средств, иммуно­ токсинов, при разработке диагностических тест-систем, микро­ чипов, но менее востребованы при создании в организме пассив­ ного иммунитета (когда востребован и Fc-фрагмент, с которым реагируют комплемент, фагоциты при реализации иммунной защиты). Мини-антитела, как и рекомбинантные полноразмерные антитела применяют в фундаментальных исследованиях, в биотехнологии, в терапии различных заболеваний, включая вирус­ ные инфекции.

Мини-антитела являются ценной альтернативой полноразмер­ ным антителам при разработке биосенсорных устройств, благодаря их стабильности, небольшим размерам и высокой специфичности взаимодействия с антигеном. К ним также легко присоединяются флуоресцирующие белки, ферменты и другие полипептиды.

132 6. МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКЕ

Для повышения избирательности действия на опухоли токсины или радиоактивные вещества конъюгируют с антителами, что обеспечивает доставку действующего вещества непосредственно к опухолевым клеткам. Моноклональные антитела, связанные с токсинами называются иммунотоксинами; для их получения к антителам чаще всего присоединяют бактериальные (дифтерий­ ный, псевдомонадный) или растительные (рицин А, сапонин) токсины. Показана эффективность применения иммунотоксинов для лечения лимфом и некоторых других опухолей. С целью радиотерапии используются конъюгаты фрагментов моноклональ­ ных антител с радиоактивными изотопами (йод-131, иттрий-90 и др.). Учитывая малую проникающую способность таких мини­ антител, нагруженных изотопами, их применение возможно для небольших опухолей и метастазов, но не для крупных опухолевых очагов.

К хорошо изученным противоопухолевым препаратам отно­ сится Герцетин (Трастузумаб). Эти рекомбинантные монокло­ нальные антитела связываются с рецептором HER2/neu на поверхности клеток многих солидных опухолей. Герцетин высоко­ эффективен при запущенном раке молочной железы. Интенсивно изучается совместное применение Герцетина и химиотерапии при лимфомой, лимфомой мантийной зоны, лимфоплазмоцитарной лимфомой и др. На лечение отвечают полной или частичной ремиссией до 48% пациентов из группы резистентных к традиционной химиотерапии.

6.3. Терапевтические антитела метастазах рака молочной железы. Установлено, что Герцетин усиливает лечебный эффект химиотерапии.

Алемтузумаб представляет собой препарат из гуманизирован­ ных моноклональных антител которые связываются с антигеном СД52 на поверхности клеток и направляют иммунную систему организма на уничтожение этих клеток; эффективен при лечении хронического лимфолейкоза, а также при ревматоидном артрите, аутоиммунных заболеваниях.

Омализумаб —препарат из гуманизированных моноклональных антител, избирательно связывающихся с IgE и предотвращающих его взаимодействие с высокоаффинными рецепторами тучных клеток, выделяющих медитаторы аллергической реакции; исполь­ зуется при бронхиальной астме, аллергических заболеваниях.

В случае использования моноклональных антител в качестве лекарства, название препарата оканчивается на «таЬ» (от английского «monoclonal antibody»), (таблЮ).

CTLA41g Алемтузумаб Антитела к CD52, Базилисимаб Антитела к CD25 отторжения озогамицин рованные с калихеамицином

134 6. МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА В ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКЕ



Pages:     | 1 |   ...   | 18 | 19 || 21 | 22 |   ...   | 35 |
 


Похожие работы:

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ, МОЛОДЕЖИ И СПОРТА УКРАИНЫ ТАВРИЧЕСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им. В.И.ВЕРНАДСКОГО Географический факультет ЛЕТОПИСЬ КАФЕДРЫ ГЕОЭКОЛОГИИ 2010-2011 учебный год Симферополь - 2011 Летопись кафедры геоэкологии ТНУ: 2010-2011 годы 2 Предисловие В прошедшем 2010-2011 учебном году кафедра геоэкологии продолжала совершенствовать свою преподавательскую работу и научно-исследовательскую деятельность. Учебный год был насыщен самыми разными интересными событиями. Основные...»

«Аннотация Дарвинизм – это программа-минимум для всех, кто изучает эволюцию живой природы. Книга Чарльза Дарвина – научный труд, написанный интересно и эмоционально, в популярной форме, с разъяснением многообразных биологических понятий и явлений живой природы. Содержание Введение 14 Глава I. Вариации при доместикации 23 Причины изменчивости. 23 Действия, привычки и употребления или 31 неупотребления органов. Общий характер домашних 40 разновидностей. Трудности при различении разновидностей и...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ ЦЕНТР ПРАКТИКУМ ПО ДЕНДРОЛОГИИ для студентов техникумов по специальности 2604 Лесное и лесопарковое хозяйство Москва – 2005 2 6Л2 Зуихина С.П., Коровин В.В. Практикум по дендрологии. Учебное пособие для студентов техникумов по специальности 2604 Лесное и лесопарковое хозяйство – М.: 2005. – 85 с., 23 рис. Разработано в соответствии с Государственным образовательным стандартом ВПО 2000 г. для направления подготовки 656300 на основе...»

«Твердые отходы в Израиле Системный анализ Пособие для русскоязычных репатриантов Действенно жить – это значит жить, располагая правильной информацией Норберт Винер, потомок рабби Моше бен Маймона Иерусалим 2002 (5763) В подготовке и издании пособия принимали участие: проф. Нонна Манусова – президент ЭКОСТ, д-р Александр Цикерман – директор ЭКОСТ; д-р Юлий Ильевский; Регина Школьник; проф. Михаил Иоелович; инж. Татьяна Клинова; д-р Ефим Манусов – главный редактор; адв. Валентина Нелина; д-р...»

«ОБЩИЕ ВОПРОСЫ ОСОБЕННОСТИ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ДИВЕРГЕНЦИИ ПОПУЛЯЦИЙ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ, АККЛИМАТИЗИРОВАННЫХ В ГОЛАРКТИКЕ Гордеева Н.В., Салменкова Е.А. ПРИЦИПЫ СОЗДАНИЯ НАЦИОНАЛЬНОЙ СИСТЕМЫ РАННЕГО ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ПО ЧУЖЕРОДНЫМ ВИДАМ Дгебуадзе Ю.Ю., Панов В.Е., Шестаков В.С., Дианов М.Б. ОБЩАЯ КОНЦЕПЦИЯ СОЗДАНИЯ ПРОБЛЕНМНО–ОРИЕНТИРОВАННОГО ИНТЕРНЕТ ПОРТАЛА ПО ИНВАЗИЯМ ЧУЖЕРОДНЫХ ВИДОВ В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Дгебуадзе Ю.Ю., Петросян В.Г., Павлов А.В., Бессонов С.А., Масляков В.Ю., Морозова О.В., Царевская...»

«ЛОМИДЗЕ СЕРГО ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РАСТИТЕЛЬНОГО ПРЕПАРАТА КК–86 на соискание ученой степени доктора ветеринарии представлена ДИССЕРТАЦИЯ Специальность – Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология, иммунология, паразитология Руководитель – член-корр.академии с.-х.наук Грузии, профессор Т.К. Курашвили Тбилиси 2011 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ; ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ; 1. Лекарственные растения в прошлом; 2. Использование лекарственных растений в ветеринарии против грибковых и...»

«Проект ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПО СОЗДАНИЮ РЕГИОНАЛЬНОГО ЗАКАЗНИКА ТУЛОС Карельский научный центр РАН Институт биологии Ответственный исполнитель О.Л. КУЗНЕЦОВ Петрозаводск 2014 This project is co-funded by the European Union, the Russian Federation and the Republic of Finland ВВЕДЕНИЕ Сохранение ландшафтного и биологического разнообразия любого региона на базе рационального природопользования и путем создания сети особо охраняемых природных территорий (ООПТ) различного статуса является...»

«ЛЕСНОЙ КОДЕКС РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Принят Государственной Думой 8 ноября 2006 года Одобрен Советом Федерации 24 ноября 2006 года (в ред. Федеральных законов от 13.05.2008 N 66-ФЗ, от 22.07.2008 N 141-ФЗ, от 22.07.2008 N 143-ФЗ, от 23.07.2008 N 160-ФЗ, от 25.12.2008 N 281-ФЗ, от 14.03.2009 N 32-ФЗ, от 17.07.2009 N 164-ФЗ, от 24.07.2009 N 209-ФЗ, от 27.12.2009 N 365-ФЗ, от 22.07.2010 N 167-ФЗ, от 29.12.2010 N 442-ФЗ, от 14.06.2011 N 137-ФЗ, от 01.07.2011 N 169-ФЗ, от 11.07.2011 N 200-ФЗ, от...»

«СХЕМА КОМПЛЕКСНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ И ОХРАНЫ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ БАССЕЙНА РЕКИ ВОЛХОВ Книга 1 Общая характеристика речного бассейна 1 ПРОЕКТ Схема комплексного использования и охраны водных объектов Книга 1. Общая характеристика речного бассейна Общая часть Основной задачей разработки СКИОВО, включая НДВ, бассейна реки Волхов является формирование инструментария принятия управленческих решений по достижению устанавливаемых СКИОВО бассейна реки Волхов целевых показателей качества воды водных объектов...»

«Программа итоговой государственной аттестации по специальности 020801.65 Экология МУРМАНСК 2009 Печатается по решению редакционно-издательского совета Мурманского государственного педагогического университета Утверждена учебно-методическим советом МГПУ 22.12.2009 Рецензенты: В.В. Денисов, доктор географических наук, профессор (ММБИ КНЦ РАН) Л.Г. Павлова, доктор географических наук, профессор кафедры географии и экологии МГПУ Составители: А.В. Николаев, канд. вет. наук, зав. кафедрой географии и...»






 
© 2013 www.knigi.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.