WWW.KNIGI.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     | 1 |   ...   | 15 | 16 || 18 | 19 |   ...   | 35 |

«'ч ж Ж у. ч № Ж v ^ jjif 'slfe * |j j | ф v j^ vj АЛМАГАМБЕТОВ К.Х. МЕДИЦИНСКАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ $$ ш® ф ф Ф ф Ф ШФ ш • ' ~§р ^Р 5$ s& Астана - 2009 щ УДК 60 БКК 52.81 ...»

-- [ Страница 17 ] --

Перспективно использование в качестве продуцента интерферона эукариотных микроорганизмов - Saccharomyces cerevisiae. Эти продуценты характеризую тся отработанной технологией их ферментации в промышленных условиях, легко сепарируются, не содержат токсичных и пирогенных веществ, как у грамотрицатель­ ных бактерий; могут осуществлять процессинг, т.е. отщеплять сигнальный пептид; обладают собственными сайтами инициации и терминации.

Рекомбинантные препараты интерферонов (реаферон-ЕС, интераль и др.) применяются, в первую очередь, при острых и хронических вирусных гепатитах, герпетических поражениях, гриппе и др. Показана эффективность интерферонов при лечении цитомегаловирусной инфекции, различных бактериальных инфекций (гнойно-септические осложнения у новорожденных, у хирургических больных, хламидиоз и др.). Интерфероны исполь­ зуются в комплексной терапии при онкологических заболеваниях.

Наряду с монопрепаратами интерферона в клинической практике используются комбинированные формы: виферон (с витамины С и Е), кипферон (с иммуноглобулинами M,A,G) и др.

* 5.5. Интерлейкины. Эритропоэтин Группа цитокинов, обладающих провоспалительными, рос­ товыми и другими регуляторными функциями в межклеточных взаимоотношениях иммунной, нервной, эндокринной и крове­ творной систем носит общее название «интерлейкины» (ИЛ1, ИЛ2,....ИЛ25). Эти биологически активные соединения выраба­ тываются лейкоцитами, моноцитами, макрофагами и др.

Синтез интерлейкинов начинается в ответ на внедрение микроорганизмов или повреждение тканей и запускает комплекс защитных реакций организма. Стимулируется функция лейко­ цитов, наблюдается активация клональной пролиферации и диффе­ ренциации Т и В-лимфоцитов, усиление эффективного потенциала цитотоксических Т-лимфоцитов (СД8-клеток) и естественных киллеров (NK-клеток), а также усиление функциональной актив­ ности мононуклеарных фагоцитов и антигенпрезентирующих клеток, увеличение синтеза плазматическими клетками специфических иммуноглобулинов большинства изотипов, наряду с уменьшением апоптоза мононуклеаров и нейтрофилов.

Производство человеческого интерлейкина основано на техно­ логии рекомбинантной ДНК. Ген человеческого интерлейкина

5. РЕКОМБИНАНТНЫЕ БЕЛКИ ЧЕЛОВЕКА

встраивается в плазмидный вектор и трансформируется в бакте­ риальные клетки E.coli либо в дрожжевые клетки Saccharomyces cerevisiae. Так плазмидная конструкция, трансформированная в дрожжевые клетки содержит ген человеческого ИЛ2 и фрагмент ДНК маркерного пептида, кодирующие синтез химерного белка.

Последний не только стабилизирует, защищает от внутрикле­ точного расщепления человеческий белок, нб и в последующем облегчается очистка и выделение ИЛ2 путем аффинной хрома­ тографии. Известны следующие коммерческие препараты реком­ бинантного интерлейкина (ИЛ2): Ронколейкин (Sacch. cerevisiae), Proleukin, Teceleucin (E.coli) и др.

Эритропоэтин Ежедневно в организме человека образуется более 200 мил­ лиардов клеток крови. Этот процесс регулируется различными механизмами с участием системы факторов роста клеток костного мозга. Факторы роста миелоидных клеток костного мозга в орга­ низме продуцируются различными типами клеток: фибробластами, эндотелиальными клетками, макрофагами, Т-лимфоцитами.

Четыре человеческих белка - ростовых фактора в настоящее время производятся с использованием рекомбинантных штаммов микроорганизмов:

- грамостим, филграстим и ленограстим - это факторы роста лейкоцитарного ростка;

- эритропоэтин (ЭПО) или эпотин - это фактор роста эритроидного ростка.

Среди коммерческих препаратов, полученных технологией рекомбинантных ДНК по объему промышленного производства и реализации лидируют инсулин и эритропоэтин.

Эритропоэтин - гликопротеин, вырабатываемый в почечной ткани и избирательно стимулирующий размножение и дифференцировку в костном мозге клеток-предшественников эритро­ цитов (рис.35). В качестве рекомбинантных штаммов-продуцентов эритропоэтина использую тся E.c o li. B.su b tilis и другие микроорганизмы, трансформированные плазмидными векторами, несущими ген человеческого эритропоэтина. Известны следующие 5.5. Интерлейкины. Эритропоэтин Рекормон, Э ритростим, Эпокрин, Эпрекс и др. Эритропоэтин применяется в первую очередь для лечения анемии у больных с хронической почечной недостаточностью, а также при анемии у недонош енных детей, анемии после операции, облучения, при онкологических заболеваниях, при пересадке костного мозга и др.

единица эритроидная Проэритробласт Рекомбинантный фактор свертывания крови VIII В клетки почек детенышей хомячков (ВНК) трансфицирован при помощ и вирусного вектора ген человеческого ф актора свертывания крови VIII (FVIII). Питательная среда, используемая для культивирования этих клеток содержит раствор белков плазмы человека и рекомбинантный инсулин (стимулятор роста), но не содержит белков животного происхождения. Процесс очистки культуры клеток ВНК включает этап вирусной инактивацйи при помощи детергента с последующей ионообменной или ионоаф­ финной хроматографией с использованием иммобилизованных моноклональных антител, специфически связывающих белок — реком бинантны й ф актор сверты вания крови V III.Н а основе рекомбинантного фактора свертывания крови VIII разработан гем остатический препарат «Когенэйт ФС», представляю щ ий 112 5. РЕКОМБИНАНТНЫЕ БЕЛКИ ЧЕЛОВЕКА собой высокоочищенный гликопротеин, состоящий из нескольких пептидов. Препарат обладает такой же биологической актив­ ностью, как и фактор VIII, получаемый из плазмы крови человека.

Применяется с целью профилактики и лечения кровотечений при гемофилии А.

Фермент —рекомбинантная проурокиназа Технология получения рекомбинантной проурокиназы осно­ вана на трансфекции E.coli плазмидным вектором со встроенным геном, кодирующим синтез человеческой проурокиназы. Выде­ ляют генетически модифицированный штамм, продуцирующий целевой продукт. Отобранные трансформанты культивируют в оптимальных для накопления рекомбинантного полипептида условиях. Очищают и проводят реактивацию экспрессированного продукта - белка. При получении плазмиды для экспрессии полипептида в клетках E.coli объединяют оперон с регулируемым промотором последовательности связывания с рибосомой ШайнДальгарно, инициирующий кодон, фрагмент ДНК, кодирующий целевой полипептид, один или два терминатора, располагаемых за указанным фрагментом. Для объединения используют плазмиду pBR 322, из которой удалены nic / bom область и/или часть резистентного к тетрациклину гена. В последнюю между сайтами Е coRI и Hind III вводят сайт множественного клонирования, предназначенный для встраивания терминатора транскрипции, фрагмента ДНК, кодирующего рекомбинантный белок и синтети­ ческого Tip - промотора. Получают полипептид с проурокиназной активностью, его молекулярная масса 54 ОО Да, состоит из двух цепей, соединенных дисульфидным мостиком. Фермент специ­ фически катализирует превращение плазминогена в плазмин — протеазу, способную лизировать фибриновые сгустки. Проурокиназу рекомбинантную применяют в качестве тромболитического средства при лечении острого инфаркта миокарда в первые часы от момента развития заболевания.

5.6. Рекомбинантные белки, экспрессируемые в рас Первым фармацевтически значимым белком, экспрессирован­ ным в растениях табака и подсолнечника в 1986 году, явился человеческий гормон роста. В начале исследований большинство белков экспрессировали в трансгенном табаке и экстрагировали из его листьев. В последующие годы были получены трансгенные картофель, морковь, рис и другие растения - продуценты рекомби­ нантных белков. Некоторые белки, синтезируемые этими транс­ генными растениями уже применяются в медицинской практике.

Вначале эти белки экспрессировались генами человека, трансфицированными в ядерную ДНК растений, с низкой концентрацией конечного продукта, обычно менее 0,1% от растворимого белка клеток. В последующем было выявлено, что в случае трансформации генов человека в хлоропласты, выход рекомбинантного белка был в 10-100 раз больше, уровень экспрессии достигал 7-11%. В одной растительной клетке в среднем содержится от 5 до 10 тыс. копий хлоропластной ДНК, поэтому суммарный уровень экспрессии рекомбинантного белка достигает требуемых значений.

Экспрессия целевых белков в запасной ткани семян, где уровень биодеградации ниже, чем в обводнённых тканях (листья, плоды), также способствует повышению продуктивности на 2-3 порядка.

В клетках высших растений происходят гликозилирование и посттрансляционная модификация и правильная укладка (фолдинг) полипептидаых цепей белков, сходные с таковым в клетках млекопитающих. Культивирование растений не требует дорогостоящего оборудования, а сельскохозяйственные масштабы продукции I гарантируют доступность рекомбинантного препарата в количествах, достаточных для широкого терапевтического использования. В отличие от животных, растительные клетки не содержат в своём составе патогенные для человека вирусы, а также прионы и, таким образом, могут служить безопасным источником рекомбинантных белков медицинского назначения.

Векторы доставки генетического материала в клетки растений:

- вирусы растений (широко используются вирус табачной мозаики - ВТМ и вирус мозаики коровьего гороха - ВМКГ трансформированные в Nicotiana benthamiana);

- методы прямой доставки чужеродных генов в растительный геном, такие, как микроинъекции, электропорация и биобаллистика ДНК;

- перенос с помощью Ti- плазмиды агробактерий. Использование Ti-плазмиды, основанное на природной способности почвенной бактерии Agrobacterium tumefaciens переносить часть своей собственной ДНК в виде Т-области мегаплазмиды (Tiплазмиды) в растительные клетки ограничивается, как правило, только двудольными культурами.

В трансгенных растениях перенесенные гены в составе плаз­ миды либо после их прямой трансфекции в клетки стабильно встраиваются в ядерный геном и сохраняются в последующих симы ми генами в составе вирусного вектора наблюдается времен­ ная (транзиентная) экспрессия рекомбинантного белка. Накоп­ л ен и е соответствующих белковых продуктов будет определяться щ еством вирусного пути накопления белков в растениях является короткий период размножения вирусных частиц, простота инфи­ цирования растений, а также широкий диапазон различных видов растений, которые могли бы быть использованы для этих целей.

/ Интерлейкины IL-2, IL-4, 1Лейшманиоз, / колониестимулирующий / Антираковая терапия / Табак I фактор[_ / Вместе с тем существуют определенные проблемы использо­ вания растений в качестве продуцентов рекомбинантных белков:

это все же низкий уровень экспрессии трансфицированных в растительные клетки генов, даже при наличии сильных промо- I торов, соответственно небольшой выход рекомбинантного белка;

вы сокая скорость деградации мРНК трансфицируемого гена и протеолиз экспрессируемых рекомбинантных белков в цитоплазме растительной клетки.

5.6. Рекомбинантные белки, экспрессируемые в растениях Наряду со «съедобными» вакцинами трансгенные растения привлекательны как продуценты рекомбинантных терапевтичес­ ких белков (табл. 8):

- создание трансгенных растений моркови с генами ИЛ 10 и ИЛ 18 человека.



Pages:     | 1 |   ...   | 15 | 16 || 18 | 19 |   ...   | 35 |
 


Похожие работы:

«СОВЕТЫ ПЧЕЛОВОДАМ Кемеровское книжное издательство 1991 Эта книга адресована всем, кто уже занимается пчеловодством или хочет заняться этим очень полезным, доходным и увлекательным делом, но не знает, как и с чего начинать. Автор, известный в Сибири специалист по пчеловодству, профессор В. Г. Кашковский отвечает на многие вопросы, которые нередко возникают перед сибирскими пчеловодами. По существу, это книга советов. Приобретая ее, вы многие из них сможете применить на практике. 2 Содержание...»

«МИР ПРИРОДЫ В МИРЕ ИГР ОПЫТ ФОРМИРОВАНИЯ ОТНОШЕНИЯ К ПРИРОДЕ Мир природы в мире игр: опыт формирования отношения к природе. /Экологопросветительский центр Заповедники. В.А. Ясвин. – М., 1998. – 40 с. Праздность дети, как правило, ненавидят. Вы должны превращать для них необходимые, по вашему мнению, занятия в развлечение, а не делать из них обязательную работу. Джон Локк.Мысли о воспитании, 1693 г Посвящается Маргаритке и Янке От автора В этой небольшой книжке представлен десятилетний опыт...»

«GEOECOLOGICAL STATE OF ENVIRONMENT IN SURROUNDINGS OF KYZYL-TASHTYG POLYMETALLIC DEPOSIT (TUVA) EDITOR-IN-CHIEF CANDIDATE OF GEOLOGO-MINERALOGICAL SCIENCES A.M. SUGORAKOVA TuvIENR SB RAS Kyzyl – 2012 ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ ТУВИНСКИЙ ИНСТИТУТ КОМПЛЕКСНОГО ОСВОЕНИЯ ПРИРОДНЫХ РЕСУРСОВ РАН СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ ГЕОЭКОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ПРИРОДНОЙ СРЕДЫ В РАЙОНЕ...»

«УТВЕРЖДАЮ Руководитель ООП подготовки Магистров А.Г. Емельянов 2012 г. Учебно-методический комплекс по дисциплине Методы региональных геоэкологических исследований, 1 курс (наименование дисциплины, курс) 022000.68 Экология и природопользование (шифр, название направления подготовки) Геоэкология (название специализированной программы подготовки магистров) Обсуждено на заседании кафедры Составитель: физической географии и экологии к.г.н., доцент А.А. Цыганов 25 апреля 2012 г. Протокол № 4 Зав....»

«РАЗРАБОТКА ДОКУМЕНТАЦИИ ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРОИЗВОДСТВА РЕМОНТНЫХ ДНОУГЛУБИТЕЛЬНЫХ РАБОТ ДЛЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ПРОЕКТНЫХ ГАБАРИТОВ АКВАТОРИИ И ПОДХОДНЫХ КАНАЛОВ В МОРСКИХ ПОРТАХ АРХАНГЕЛЬСК И ОНЕГА ОЦЕНКА ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ОКРУЖАЮЩУЮ СРЕДУ ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ КНИГА 2 МОРСКОЙ ПОРТ ОНЕГА Главный инженер А.В. Рябинин Главный инженер проекта М.И. Серченков 0106-4580-00-ПОВОС РАЗРАБОТАНО: Должность Подпись Дата И.О. Фамилия Руководитель отдела П.Ф. Романюк ОЭОП Главный специалист И.А....»

«СОГЛАСОВАНА УТВЕРЖДАЮ Заместитель директора по НМР Директор гимназии №2 _ Т.В.Лимберг _И.А.Шендрик _ _ 2013 года _ _2013 г. РАБОЧАЯ ПРОГРАММА По курсу Биология Ступень обучения основное общее образование для 6 А, 6Б, 6 В, 6Г, 6 Я классов РАЗРАБОТЧИК: Передериева Елена Валентиновна учитель биологии ПРИНЯТА На заседании методического объединения Протокол № от _ _ 2013 года Руководитель МО _ Е.В. Белобородова 2013 г. Пояснительная записка Рабочая программа курса биологии составлена на основе...»

«Чарльз Дарвин Происхождение видов Ч.Дарвин. Сочинения, т.3: Изд-во АН СССР; Москва; 1939 Аннотация Дарвинизм — это программа-минимум для всех, кто изучает эволюцию живой природы. Книга Чарльза Дарвина — научный труд, написанный интересно и эмоционально, в популярной форме, с разъяснением многообразных биологических понятий и явлений живой природы. Чарльз Дарвин О происхождении видов путем естественного отбора или сохранении благоприятствуемых пород в борьбе за жизнь Введение Путешествуя на...»

«В связи с изменениями законодательства Российской Федерации об охране окружающей среды в целях совершенствования разграничения государственных полномочий: 1. Установить, что Красная книга Республики Саха (Якутия) учреждается для сохранения биологического разнообразия, обеспечения более эффективной охраны редких и находящихся под угрозой исчезновения диких животных и дикорастущих растений и грибов, обитающих и произрастающих на территории Республики Саха (Якутия), пропаганды природоохранных...»

«№ Сроки Наименование мероприятий Ответственный п/п исполнения Агентство природных Проведение семинаров-совещаний для ресурсов и экологии субъектов малого и среднего бизнеса по Архангельской вопросам соблюдения природоохранного март-июнь области, ОГУ 1. законодательства в муниципальных Госэкоинспекция по образованиях. Архангельской области Агентство природных ресурсов и экологии Архангельской Проведение торжественного мероприятия области, ФГУ НП посвященному объявлению Дней защиты от март 2....»

«МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ КЛЕТКИ 2-Е ИЗДАНИЕ, ПЕРЕРАБОТАННОЕ И ДОПОЛНЕННОЕ В 3 томах 3 Перевод с английского канд. биол. наук В. П. Коржа, канд. биол. наук Н.В. Сониной, канд. биол. наук Н. М. Руткевич, канд. биол. наук Г. И. Эйснер, Т. Д. Аржановой, Г. В. Крюковой, А. В. Никашина под редакцией акад. Г. П. Георгиева, д-ра биол. наук Ю.С. Ченцова Москва 1994 4 ББК 28.070 М75 УДК 576.32/36 Издание выпущено в счет дотации, выделенной Комитетом РФ по печати Авторы: Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф...»






 
© 2013 www.knigi.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.